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血清知識——熱滅活血清如何處理？有必要對血清進行熱滅活嗎？
發(fā)布時間： 2021-08-18 點擊次數(shù)： 6752次
血清熱滅活
1. 為何會有熱滅活血清呢？ 加熱可以滅活補體系統(tǒng)。啟動的補體系統(tǒng)參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，啟動淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化。在免疫學(xué)研究中，培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時，推薦使用熱滅活血清。
2. 血清熱滅活是否必要？ 血清熱滅活的步驟在1970年代就已建立，至今成為很多實驗室的常規(guī)血清前處理步驟；但許多先前認(rèn)為必須熱滅活的原因，卻早已經(jīng)不再成立：
●去除支原體污染?
早期血清加工使用的450nm濾膜，早已被100nm濾膜取代；且隨著加工技術(shù)的創(chuàng)新及嚴(yán)格的監(jiān)控，血清產(chǎn)品早已沒有支原體污染的疑慮。●去除補體等對熱敏感的物質(zhì)?
胎牛血清中含有的補體僅為成年牛血清5-50％，而C3（補體中引起免疫反應(yīng)的主成分）在胎牛血清中則幾乎不能檢出，直接使用血清對大多數(shù)的細(xì)胞株沒有負(fù)面影響。實驗顯示，大多數(shù)的細(xì)胞不需要熱滅活血清，對于非必須的細(xì)胞來說血清滅活對于細(xì)胞生長只有微小甚至無任何作用，還可能造成生長速率降低，沉淀物還會顯著增多，不利于細(xì)胞觀察。因此，若非必須，不需要對血清進行滅活處理。
3. 血清熱滅活對細(xì)胞生長有幫助嗎？ 細(xì)胞生物學(xué)家比較了正常熱滅活胎牛血清對各種細(xì)胞株的生長能力影響，發(fā)現(xiàn)11株細(xì)胞中，熱滅活對6 株細(xì)胞有負(fù)面影響（紅）、3株無影響（綠）、2株有微弱正面改善（黃）。
▲ 使用未滅活或滅活血清的細(xì)胞生長狀況
所以，在正常操作下，熱滅活通常對“細(xì)胞生長"沒有明顯的促進作用，反而會破壞血清內(nèi)生長因子，維生素，氨基酸等珍貴物質(zhì)，降低細(xì)胞增殖速度。
4. 血清熱滅活的缺點？ 若實驗員設(shè)錯水浴溫度或忘記按計時器，都會導(dǎo)致過高的加熱溫度（下圖）或過長的加熱時間（下圖），進而大大降低血清的功能，影響細(xì)胞生長的表現(xiàn)。
缺點1：
▲ 過高的加熱溫度降低大多細(xì)胞株生長速度（僅一株未受明顯影響）
缺點2：
▲ 過長的加熱時間降低大多細(xì)胞株生長速度（僅一株未受明顯影響）
滅活加熱過程會增加血清的沉淀狀況，而沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染，進而耗費大量時間及精力驗證是否污染，導(dǎo)致實驗一再拖延。
5. 若細(xì)胞一定要使用熱滅活血清怎么辦？ 將需要進行處理的血清置于56℃水浴30min，建議加放空白對照（同體積水）使用溫度計測溫，以測得溫度為56℃時為計時起始點，加熱中可不時輕度旋轉(zhuǎn)混勻血清。
在滅活過程中，除了需要嚴(yán)格監(jiān)測加熱溫度及認(rèn)真計算時間，還有幾個小技巧可以注意噢！
滅活時，水浴槽水面與血清液面等高！
使用水浴槽時，大多數(shù)人為避免血清瓶浮起來，會減少水浴槽內(nèi)的水量，讓水面降低；數(shù)據(jù)顯示，降低水面也會使瓶內(nèi)加熱不均、拉長加熱時間，增加血清破壞程度；所以還是建議將水浴槽內(nèi)水量增加，讓水面與血清液面等高，讓血清最大面積的接觸水流，提高滅活效率！
▲ 對比圖
至于血清瓶漂浮的問題，套上燒瓶用鉛環(huán)（下圖）就解決啦！
▲ 固定
滅活后，使用冷水浴降溫！
滅活后如果直接放在室溫或4度冰箱冷卻，僅靠空氣傳導(dǎo)散熱，冷卻效果差（下圖），使得實際降溫時間拉長，對血清的影響較大；反之，流動的冷水浴散熱速度較快，冷卻效果佳，縮短降溫時間的同時，也減少對血清的破壞。
▲ 對比圖
現(xiàn)代血清加工技術(shù)進步，熱滅活已成為非必要步驟。熱滅活對細(xì)胞生長沒有明顯促進作用，反而會破壞血清、增加沉淀狀況。除非文獻指出該細(xì)胞必須使用滅活血清，一般細(xì)胞培養(yǎng)可省略血清熱滅活步驟。
如果必須使用滅活血清，加熱時水浴槽水面高度盡量與血清液面等高；滅活后使用冷水浴取代冰箱降溫，能大輻度減少對血清的破壞。直接選擇購買已滅活的血清產(chǎn)品，也是個好選擇噢！
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