細(xì)胞培養(yǎng)之真菌細(xì)菌污染的防治方法

請(qǐng)遵守細(xì)胞污染永恒定律：無(wú)論什么細(xì)胞只要是不重要的細(xì)胞污染了，立刻加84棄之，重新復(fù)蘇新凍存管培養(yǎng)；實(shí)在需要挽救的請(qǐng)參考以下：

細(xì)菌污染：主要有洋蔥霍爾伯德菌型污染

確定是非常珍貴的細(xì)胞 建議分別配置含10倍慶大霉素和兩性霉素溶液（G/A)的PBS和5倍慶大霉素和兩性霉素溶液（G/A)的*培養(yǎng)基各一份。然后先用10倍雙抗的PBS洗滌細(xì)胞5-10次， 然后用5倍雙抗的*培養(yǎng)洗滌細(xì)胞3次以上,再加上含雙倍的G/A溶液放培養(yǎng)箱培養(yǎng)，一個(gè)小時(shí)后換液，持續(xù)4個(gè)小時(shí)后，再加上正常培養(yǎng)細(xì)胞所需的抗生素，過(guò)夜，到最終確定細(xì)胞沒(méi)有任何污染物，因此時(shí)細(xì)胞受損過(guò)大，建議優(yōu)化培養(yǎng)基方式（血清提高2%-5%）或者立即凍存細(xì)胞，一個(gè)月后復(fù)蘇。

真菌污染：

污染的多是曲霉菌，白色念珠菌，酵母菌，黑霉菌，孢子菌，真菌主要以預(yù)防為主，防治為輔，已經(jīng)污染了，建議采用以下方法：

1. 細(xì)胞一旦污染，很難挽救，即使使用制霉菌素或放線菌素D，也是傷敵八千自損一萬(wàn)的辦法，可使用抗生素進(jìn)行查殺，但是高濃度的抗霉菌素對(duì)細(xì)胞有毒性作用。

2. 把所有細(xì)胞從污染的CO2孵箱轉(zhuǎn)移，采用過(guò)氧乙酸擦洗孵箱(全部，尤其四個(gè)角)。并把過(guò)氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個(gè)小時(shí)，使其蒸汽彌漫。待過(guò)氧乙酸的氣味消散后，再移入細(xì)胞；

3. 用0.5%新潔爾滅擦拭超凈臺(tái)和墻壁，確保不留死角，地面用新潔爾滅消毒液拖地。

4. 將環(huán)境*消毒，整個(gè)培養(yǎng)間高錳酸鉀或者乳酸熏蒸,孵箱內(nèi)部包括托盤(pán)等全部用苯酚搽洗,封閉2天。

真菌污染預(yù)防方法：

1)，將細(xì)胞移出來(lái)，用微量硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi)，再把水盤(pán)里加適量硫酸銅或者酸氫二鈉高鹽液體防止霉菌

2)孵箱應(yīng)定期清潔，大約一個(gè)月左右清潔一次，

3)可在培養(yǎng)基里加兩性霉素或制霉菌素)或[放線菌素D或雙抗進(jìn)行預(yù)防。

4)最主要的還是要培養(yǎng)良好的無(wú)菌觀念，實(shí)驗(yàn)室盡量不要大聲說(shuō)話，佩戴好口罩，手套，操作時(shí)應(yīng)小心，避免培養(yǎng)基撒入培養(yǎng)箱以及生物安全柜，這些撒入培養(yǎng)箱的培養(yǎng)基為細(xì)菌及真菌的繁殖提供了很好的條件。