6個小細節(jié)，輕松搞定細胞“劃痕實驗”

傷口愈合試驗，也通常稱為“劃痕試驗"，是一種廣泛建立的研究體外集體細胞遷移的技術。細胞劃痕（Wound Healing)是一種操作簡單，經(jīng)濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。其實驗原理是，當細胞長到融合成單層狀態(tài)時，在融合的單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域，稱為“劃痕"。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕"愈合。

條件好的實驗室可使用活細胞成像來分析創(chuàng)傷愈合實驗中角質(zhì)形成細胞或者成纖維細胞的遷移活動。結合包含的軟件分析算法，有可能延遲量化間隙表面關閉和關閉推移時間的速度，但是使用延時顯微鏡獲取數(shù)據(jù)的優(yōu)點是，可以在恒溫箱內(nèi)確定和穩(wěn)定的條件下記錄傷口分析。

通常，用于傷口愈合試驗的細胞類型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細胞系和原代細胞經(jīng)常被用作這方面的模型。較為常用的細胞類型是角質(zhì)形成細胞和成纖維細胞。

那么制作劃痕實驗需要注意些什么呢？

1. 細胞的密度；劃痕實驗一般是幾種細胞的結合，但是每種細胞的生長速度會不一樣，所以需要按照細胞的生長特性調(diào)整培養(yǎng)時間，細胞鋪滿孔底時劃痕的效果會比較好，建議是100%的鋪滿。

2. 用槍頭畫線時盡量垂直，以6孔板為例 ，一個孔可以畫6條線

3. 畫線之后一定要用PBS洗兩次，以去除劃下的細胞

4. 注意培養(yǎng)方式一定要改成無血清或者低血清的培養(yǎng)基，因為：劃痕后用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞，意在說明在監(jiān)測的 24 小時內(nèi)，劃痕的縮小是細胞 遷移作用的結果，所以要將細胞增殖造成細胞遷移的影響降到最小低；但若細胞改成無血清培養(yǎng)后大面積漂浮，需要適量加入血清濃度不能高于2%。

5. （5）放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)。我們按0，10，12，15時間點取樣，拍照(具體時間依實驗需要而定)。

6. （6）統(tǒng)計方法：使用Image J軟件打開圖片后，抓取自己畫的線條，計算細胞間距離的平均值。