實(shí)時(shí)熒光定量PCR的優(yōu)化（二）

如果你所研究的靶序列有前人建立過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法，就可以在公共數(shù)據(jù)庫(kù)中查找，查看擴(kuò)增效率、特異性、靈敏度等信息，省去從頭開(kāi)始的時(shí)間。

注意，使用前人建立的方法前，需要再次驗(yàn)證這個(gè)方法的參數(shù)是不是符合描述。防止長(zhǎng)時(shí)間重復(fù)實(shí)驗(yàn)，卻得不到想要的結(jié)果的人間慘劇。

推薦的公共引物探針數(shù)據(jù)庫(kù)：

1、RTPrimerDB

這個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)的約6000個(gè)基因，來(lái)自人、擬南芥、大鼠等21個(gè)物種，相對(duì)其他數(shù)據(jù)庫(kù)豐富。這些引物和探針，也是經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的，70%已發(fā)表。使用該數(shù)據(jù)庫(kù)時(shí)建議通過(guò)網(wǎng)絡(luò)代理登錄。

2、PrimerBank 

這個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)的探針引物是通過(guò)算法設(shè)計(jì)得到的，主要包括人和小鼠的基因。數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)的小鼠引物，經(jīng)過(guò)廣泛驗(yàn)證后，被證實(shí)有83%的成功率。

3、Real Time PCR Primer Sets 

這個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)的引物和探針都經(jīng)過(guò)測(cè)試、優(yōu)化，針對(duì)多種生物設(shè)計(jì)，包括人、小鼠、大鼠等的基因。