細(xì)胞培養(yǎng)的小常識(shí)

細(xì)胞體內(nèi)外培養(yǎng)的差別是什么？

答：細(xì)胞離體后，失去了神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)和細(xì)胞間的相互影響，生活在缺乏動(dòng)態(tài)平衡相對(duì)穩(wěn)定環(huán)境中，日久天長(zhǎng)，易發(fā)生如下變化：分化現(xiàn)象減弱；形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時(shí)間后衰退死亡；或發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得不死性，變成可無(wú)限生長(zhǎng)的連續(xù)細(xì)胞系或惡性細(xì)胞系。因此，培養(yǎng)中的細(xì)胞可視為一種在特定的條件下的細(xì)胞群體，它們既保持著與體內(nèi)細(xì)胞相同的基本結(jié)構(gòu)和功能，也有一些不同于體內(nèi)細(xì)胞的性狀。實(shí)際上從細(xì)胞一旦被置于體外培養(yǎng)后，這種差異就開(kāi)始發(fā)生了。

二倍體細(xì)胞有什么特點(diǎn)？

答：二倍體細(xì)胞的染色體組型是2n核型；貼壁依賴接觸抑制；一般可傳代培養(yǎng)50代；無(wú)致瘤性。如W1-38：正常胚肺組織人二倍體細(xì)胞系。MRC-5：從正常男性肺組織中獲得的人二倍體細(xì)胞系。 

什么是動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)？                

答：所謂動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)（large-scale culture technology）是指在人工條件下（設(shè)定pH、溫度、溶氧等），在細(xì)胞生物反應(yīng)器（bioreactor）中高密度大量培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞用于生產(chǎn)生物制品的技術(shù)。目前可大規(guī)模培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞有雞胚、豬腎、猴腎、地鼠腎等多種原代細(xì)胞及人二倍體細(xì)胞、CHO（中華倉(cāng)鼠卵巢）細(xì)胞、BHK-21、Vero細(xì)胞(非洲綠猴腎傳代細(xì)胞)等，并已成功生產(chǎn)了包括狂

犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、紅細(xì)胞生成素、單克隆抗體等產(chǎn)品。

在過(guò)去幾十年來(lái)，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)經(jīng)有了很大發(fā)展，從使用轉(zhuǎn)瓶(roller bottle) 、CellCube等貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，發(fā)展為生物反應(yīng)器（Bioreactor）進(jìn)行大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)。

培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長(zhǎng)期保存嗎？

答：一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應(yīng)該在三到四周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_(kāi)始降解。

細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍，可否繼續(xù)使用？

答：如果細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍，您應(yīng)該自然溶解培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒(méi)有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基

培養(yǎng)基及其它添加物和試劑可反復(fù)凍融嗎？

答：大部分添加物和試劑最多可以凍融3次，如果次數(shù)過(guò)多會(huì)將使液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

答：要冷藏??！通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個(gè)月到一年。

CO2 培養(yǎng)箱之水盤(pán)如何保持清潔？

答：定期(至少每?jī)芍芤淮? 以無(wú)菌蒸餾水或無(wú)菌去離子水更換之。

購(gòu)買(mǎi)之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形？

答：研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少，大都是因?yàn)殡x心過(guò)程操作上的失誤，造成細(xì)胞的物理性損傷，以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心，應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)

購(gòu)買(mǎi)之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因？

答：研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳，原因比較復(fù)雜，常見(jiàn)原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳；血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳；解凍過(guò)程錯(cuò)誤；冷凍細(xì)胞解凍后，加以洗滌細(xì)胞和離心；懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞；培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤；細(xì)胞置于–80 ℃太久等。建議嚴(yán)格參照ATCC或ECACC的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇、凍存等工作。

冷凍保存細(xì)胞之方法？

答：冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃（30－60 分鐘）→-20℃( 30 分鐘) → -80℃（16－18 小時(shí)或隔夜）→ 液氮罐長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

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