酵母和細(xì)菌蛋白質(zhì)的代謝放射標(biāo)記的方法

1. 接種細(xì)胞于只含有必需氨基酸和輔因子的已知成分的基本培養(yǎng)基，于合適溫度中度振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。

2. 用新鮮的基本培養(yǎng)基稀釋培養(yǎng)物，繼續(xù)溫育至 107 細(xì)胞/ml （酵母）或?qū)?shù)期中期（細(xì)菌）。

3. 5000 g 室溫離心 10 分鐘收集細(xì)胞，用無(wú)硫酸鹽基本培養(yǎng)基重懸至 107 細(xì)胞/ml（酵母）或 5X108 細(xì)胞/ml（細(xì)菌）。

4. 加 H235SO4 至終濃度 20 μCi/ml。于適宜溫度輕度振蕩培養(yǎng) 1 小時(shí)（酵母）或 20 分鐘（細(xì)菌）。

5. 5000 g 室溫離心 10 分鐘收集細(xì)胞，吸出培養(yǎng)基，倒入放射性廢料桶。

6. 用冰冷的基本培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，如第 5 步離心收集細(xì)胞。將上清倒入放射性廢料桶。用巴氏滴管吸去離心管壁殘存的上清。