高效轉(zhuǎn)染質(zhì)粒大小10646bp、HGF-1牙齦成纖維細(xì)胞的操作方法

轉(zhuǎn)染條件

細(xì)胞密度：60左右

質(zhì)粒DNA濃度：648ng/ul

質(zhì)粒DNA大?。?0646bp

培養(yǎng)板：6孔板

轉(zhuǎn)染試劑用量：8ul

質(zhì)粒DNA用量：電訊

轉(zhuǎn)染試劑：AD600150，Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染時(shí)間：48小時(shí)

血清：Z7010FBS-500澳洲胎牛血清

細(xì)胞凍存：CE70100T無(wú)血清細(xì)胞凍存液

細(xì)胞活力檢測(cè)：K009-500，CCK8

操作方法

提前 1 天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在 60-80%左右，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻；細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程中不用換液。

分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時(shí)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。