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    如何養(yǎng)好SH-SY5Y細胞？

    發(fā)布時間： 2021-12-03　　點擊次數(shù)： 1611次

    SH-SY5Y細胞于1970年構(gòu)建，是骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細胞瘤SK-N-SH細胞系經(jīng)3次克隆后得到的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。


    如今，SH-SY5Y細胞已經(jīng)是科學(xué)研究中較為常用的細胞系之一了。


    但很多人在養(yǎng)SH-SY5Y細胞的過程中，總會遇到各種問題。今天，小編來為大家一一解答。


    SH-SY5Y細胞基本信息


    細胞名稱

    SH-SY5Y  (人神經(jīng)母細胞瘤細胞)

    細胞別稱

    SHSY5Y; SHSY-5Y; SH-Sy5y;

    SK-SH-SY5Y; SY5Y

    種屬及來源

    人（女性，4歲）

    腦神經(jīng)母細胞瘤，轉(zhuǎn)移部位骨髓

    生長特性

    半貼半懸

    生長形態(tài)

    上皮細胞樣

    生長培養(yǎng)基

    MEM/F12＋15% FBS＋1% P/S

    培養(yǎng)環(huán)境

    氣相:95%空氣,5%CO2   溫度:37℃

    推薦傳代比例

    1：3-1：4

    推薦換液頻率

    48小時/次

    凍存液配方

    55% MEM/F12+40% FBS+5% DMSO


    SH-SY5Y細胞培養(yǎng)常見問題及解決方案


    01

    收貨篇


    常溫運輸過程中，細胞不免受到震蕩和溫度變化的影響，出現(xiàn)皺縮、聚團甚至脫落的現(xiàn)象。

    遇到這種情況，不用緊張，只要正確處理，細胞就能恢復(fù)正常生長。


    收貨時皺縮

    常溫細胞收貨后，把細胞放進培養(yǎng)箱靜置2-4小時即可。


    如果4小時后細胞仍然沒有鋪展開，密度適中的前提下可以放培養(yǎng)箱中靜置過夜（過夜前倒出部分培養(yǎng)基，留5-10mL在瓶中，瓶蓋擰松）。


    收貨時聚團

    常溫細胞收貨后，先把細胞放進培養(yǎng)箱靜置2-4小時以穩(wěn)定狀態(tài)，再進行傳代。


    傳代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。


    收貨時脫落

    常溫細胞收貨后，先把細胞放進培養(yǎng)箱靜置2-4小時以穩(wěn)定狀態(tài)再處理。


    脫落后的細胞通常聚團漂浮，通過離心將漂浮的細胞團收集起來，在離心管里進行胰酶消化后重新鋪板即可。


    貼壁細胞常規(guī)方法消化下來，和處理好的脫落細胞合并，混勻后鋪板。


    收貨脫落處理步驟

    ① 1200rpm（約250g）3min離心收集細胞，去除舊培養(yǎng)基；

    ② PBS 重懸細胞，再次 1200rpm（約250g）3min離心，去除PBS；

    ③ 加入 1mL 左右 0.25%胰酶重懸細胞，吹打1-2下吹起沉淀即可； 

    ④ 放入培養(yǎng)箱約 1-3min；

    ⑤ 用移液槍輕輕吹打細胞懸液，使細胞團分散；

    ⑥ 迅速加入 3-5mL 含血清的培養(yǎng)基混勻以終止消化；

    ⑦ 1200rpm（約250g）3min離心，去除胰酶；

    ⑧ 加入新鮮培養(yǎng)基按合適比例接入無菌培養(yǎng)器皿中。


    圖片

    ▲ 收貨時皺縮、脫落

    圖片

    ▲ 處理后第三天


    02

    培養(yǎng)篇


    SH-SY5Y細胞生長較緩慢。在培養(yǎng)過程中，有以下幾點需要注意。


    能否使用DMEM/F12

    MEM/F12和DMEM/F12都可以培養(yǎng)SH-SY5Y，并且都有相應(yīng)的文獻支持。但這兩種培養(yǎng)基培養(yǎng)出來的形態(tài)會有細微差異。


    另外，使用品質(zhì)好的胎牛血清將極大改善細胞生長狀態(tài)。


    培養(yǎng)基容易變黃

    因其神經(jīng)母細胞瘤的特性，SH-SY5Y細胞成簇生長，飽和密度大。


    有時顯微鏡下看著密度不高，但細胞簇實際密度大，所以培養(yǎng)基很快就變黃了。這時候，需及時換液。


    生長異常緩慢

    當細胞培養(yǎng)一周都無法傳代時，可以將細胞消化下來，接種到更小的容器中，人為增加細胞密度，從而促進細胞生長。


    平時傳代時也要注意接種密度不能太低。


    傳代注意事項

    不建議連續(xù)消化細胞，連續(xù)消化細胞會導(dǎo)致細胞狀態(tài)變差。


    傳代時消化時間不宜過長，通常1-3min即可，若細胞解離太快可適當用PBS稀釋胰酶。


    吹打細胞時，動作輕緩一些，減少對細胞的物理刺激。


    圖片

    ▲ SH-SY5Y正常生長照片


    03

    形態(tài)篇


    SH-SY5Y細胞培養(yǎng)時，貼壁細胞和懸浮細胞同時存在，貼壁細胞呈上皮樣，有短觸角延伸出來，傾向于成簇生長，容易成團。


    懸浮細胞過多

    有文獻報道，SH-SY5Y在懸浮狀態(tài)也能維持生長。


    SH-SY5Y生長時，大部分為貼壁細胞，少量為懸浮細胞。 如果SH-SY5Y出現(xiàn)大量懸浮的細胞，就需要引起注意了。


    處理辦法

    ? 換液時將懸浮細胞離心收集，新鮮培養(yǎng)基重懸后接種回原瓶/原皿。

    ? 當貼壁細胞生長狀態(tài)良好、密度適中時，可以舍棄懸浮細胞。


    成團嚴重

    另外，SH-SY5Y細胞非常敏感，在受到溫度、化學(xué)或物理刺激后容易出現(xiàn)成團現(xiàn)象。


    一個視野下，有少量成團現(xiàn)象，無需特殊處理。成團嚴重，幾乎沒有鋪展開的細胞并且培養(yǎng)數(shù)天未展開時，就需要按以下方法特殊處理一下了。


    圖片

    ▲ 成團較嚴重的SH-SY5Y細胞


    處理辦法

    方法一： 低密度接種，用胰蛋白酶消化細胞（不超過5min），按1：6比例傳代接種，并換新的培養(yǎng)器皿。延長換液時間，3天換液一次，防止細胞脫落。

    方法二： 使用多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)器皿，以加快細胞貼壁速度，降低細胞聚集成團的幾率。

    方法三： 重新鋪板，并更換新配制的培養(yǎng)基，并加大血清比例（不超過20%）。

    方法四：接種時，減少培養(yǎng)基量（如T25加3mL）以加快細胞貼壁速度，等待細胞貼壁后（約8-12小時），再補加培養(yǎng)基。


    預(yù)防成團的方法

    ? 控制細胞密度不超過80%，當密度到達或超過80%及時傳代；傳代時切勿暴力吹打，避免對細胞造成機械刺激。

    ? 使用質(zhì)量好的培養(yǎng)基和胎牛血清，減少內(nèi)毒素等有害物質(zhì)對細胞的刺激。

    ? 請勿頻繁把細胞從培養(yǎng)箱拿出，氣溫低時需開暖氣維持細胞房溫度；使用PBS、培養(yǎng)基前37度預(yù)熱，以避免溫差對細胞造成刺激。


    以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。



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