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    原位裂解細(xì)胞的CAT分析法

    發(fā)布時間： 2021-12-15　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1180次

    材料與儀器

    轉(zhuǎn)染細(xì)胞
    Triton裂解液
    培養(yǎng)皿 培養(yǎng)箱

    步驟

    1.  60 mm 培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染了CAT表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞，用2 ml PBS洗1次。每培養(yǎng)皿加入2 ml 低滲緩沖液，在室溫下溫育2~5 min。

    2.  吸去低滲緩沖液，加入400 μl Triton裂解液。用橡膠刮子將細(xì)胞刮離培養(yǎng)血，用1 000 μl 移液器將裂解物移入1.5  ml 微量離心管中。

    3.  微量離心1 min 除去細(xì)胞核，不可溶性蛋白。將上清轉(zhuǎn)入一個干凈的微量離心管中， 進(jìn)行CAT活性分析。

     


    同實(shí)驗(yàn)其他方法

    CAT活性的層析分析法

    1.  100 mm 培養(yǎng)皿中的轉(zhuǎn)染了CAT表達(dá)質(zhì)粒的貼壁細(xì)胞，用PBS洗兩次，每次5 ml每培養(yǎng)皿加入1 ml TEN溶液。將細(xì)胞置于冰浴5 min。   2.  用橡膠

    CAT活性的相-抽提分析法

    一、來源于哺乳動物細(xì)胞 1.  按“CAT活性的層析分析法"中的步驟1~5的凍融法，制備哺乳動物細(xì)胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制細(xì)胞方法來收集細(xì)胞，則將原位裂解法的步驟1至4用以下的步驟2

    人生長激素的放射免疫分析法

    1.  取轉(zhuǎn)染了hGH表達(dá)質(zhì)粒的哺乳動物細(xì)胞的培養(yǎng)液100~500 μl。 2.  加100 μl 培養(yǎng)液或標(biāo)準(zhǔn)品至12 mm×75 mm 圓底試管中。加入100 μl 125I-

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