原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)詳解

（1）原代培養(yǎng)材料的選擇，盡量選取繁殖能力較強(qiáng)的組織，如胚胎、幼小的生物體或者腫瘤組織等。

（2）要注意無(wú)菌操作。其操作要求應(yīng)高于外科手術(shù)

（3）整個(gè)取材操作要迅速，尤其孕鼠浸泡乙醇時(shí)間1min左右，不能過(guò)長(zhǎng)，以確保胚胎細(xì)胞活性。

（4）運(yùn)用消化法時(shí)胰酶溫度應(yīng)低于37℃，濃度只需平時(shí)消化細(xì)胞濃度的一半。因?yàn)榇诉^(guò)程不像消化培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)的1~10min，而是至少20min，先消化下來(lái)的細(xì)胞在此胰酶消化液中繼續(xù)消化了10min以上。所以胰酶不能作用過(guò)強(qiáng)，否則這些細(xì)胞易被損傷而不易生存。

（5）如使用組織塊法，則應(yīng)待組織塊略干燥，能黏附于瓶壁時(shí)再使之與培養(yǎng)液接觸，匆使組織塊漂浮起來(lái)。如果組織塊沒(méi)有黏壁，則細(xì)胞不易生長(zhǎng)，即使生長(zhǎng)也因沒(méi)有貼在瓶壁上，從而因不能觀察到而無(wú)法收集到生長(zhǎng)的細(xì)胞。

（6）原代培養(yǎng)操作時(shí)，也可以使用未添加血清的DMEM或PBS洗滌子宮、胚胎或組織塊等。

（7）本實(shí)驗(yàn)也可以使用新生乳鼠做培養(yǎng)材料。此時(shí)要將乳鼠浸入75%乙醇2~3min使皮膚充分消毒，由于乳鼠原代培養(yǎng)污染概率更高，故應(yīng)小心操作，避免污染細(xì)菌。乳鼠原代培養(yǎng)細(xì)胞的存活率不及胚胎細(xì)胞培養(yǎng)的成功率。

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