293T細(xì)胞如何才能養(yǎng)得好？

 細(xì) 胞 聚 團(tuán) 嚴(yán) 重 

經(jīng)傳代后嚴(yán)重聚團(tuán)的293T細(xì)胞

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原因推斷：胰酶消化操作不當(dāng)導(dǎo)致細(xì)胞聚團(tuán)。

• 消化過度或吹打過猛導(dǎo)致細(xì)胞受傷嚴(yán)重，破損的細(xì)胞碎片容易粘連聚團(tuán)。

• 消化時(shí)細(xì)胞融合率太高，成片脫落，將不容易被吹散，容易聚團(tuán)。

解決辦法：鑒于該細(xì)胞貼壁疏松，普通0.25%胰酶消化時(shí)間控制15s-30s；吹打動(dòng)作輕柔，控制在10-20次；細(xì)胞融合率達(dá)到80%傳代即可傳代，不可長(zhǎng)的太滿。

換血清批次后嚴(yán)重聚團(tuán)的293T細(xì)胞

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原因推斷：血清來源于動(dòng)物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏哪挲g、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件而異。每個(gè)批號(hào)的組分百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。293T細(xì)胞本身有聚團(tuán)生長(zhǎng)特性，但嚴(yán)重聚團(tuán)可能受到血清里的某些因子刺激。

解決辦法：先用血清試用裝，試用效果好，可購買和血清試用裝批次相同的正裝，囤積半年或一年的用量，有效避免批間差對(duì)細(xì)胞的影響（胎牛血清在-20℃保存可達(dá)5年）。

 貼 壁 性 差 

貼壁疏松的293T細(xì)胞

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原因推斷：血清存在批間差異，而293T細(xì)胞本身特點(diǎn)就是貼壁性差，對(duì)不同批次的血清適應(yīng)性不同，就容易出現(xiàn)貼壁疏松現(xiàn)象。

解決辦法：可適當(dāng)加高血清比例（最高不超過20%）；建議試好一個(gè)血清批次多囤一些，可以避免血清批間差對(duì)細(xì)胞的影響。

原因推斷：排除掉瓶和孔板本身材質(zhì)或TC（親水處理）處理因素外，293T細(xì)胞貼壁性變差極有可能是因?yàn)榭臻g的隔離導(dǎo)致細(xì)胞自分泌或旁分泌產(chǎn)生的信號(hào)分子濃度太低，不利于細(xì)胞的貼壁或增殖。

解決辦法：在鋪板前，對(duì)孔板進(jìn)行明膠包被，可有效促進(jìn)細(xì)胞貼壁。

 轉(zhuǎn) 染 病 毒 后 細(xì) 胞 凋 亡 嚴(yán) 重 

經(jīng)病毒轉(zhuǎn)染后漂浮凋亡的293T細(xì)胞

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原因推斷：在排查了方法步驟和轉(zhuǎn)染試劑，依然沒有改善的情況下，可排查一下轉(zhuǎn)染前的營(yíng)養(yǎng)體系，尤其是血清批間差帶來的影響。很多同學(xué)說前期培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)正常呀，其實(shí)細(xì)胞形態(tài)學(xué)只是鑒別細(xì)胞是否健康的一個(gè)外在指標(biāo)，還要結(jié)合細(xì)胞其它指標(biāo)對(duì)細(xì)胞健康進(jìn)行評(píng)定（比如倍增時(shí)間，存活率）。

解決辦法：通過更換血清批次，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)并觀察轉(zhuǎn)染后的效果，比較分析出原因。