單層細(xì)胞在細(xì)胞瓶中的接種

1) 下列步驟描述胰蛋白酶處理細(xì)胞的過程（見下文“胰蛋白酶處理分離細(xì)胞"）

2) 重懸細(xì)胞于培養(yǎng)液中。

在此時進行細(xì)胞計數(shù)嚴(yán)好。若記錄傳代次數(shù)以識別細(xì)胞的生長經(jīng)歷，可按方便傳代計劃的比例稀釋細(xì)胞

3) 分裝細(xì)胞懸液于含有合適 PH 的培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。

傳代細(xì)胞在貼壁和再次進行代謝前的大約幾小時中不能自行調(diào)節(jié) PH。傳代期是特別重要的時期.

培養(yǎng)液的 pH 和細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿氣相中的 CO2 含量應(yīng)在接種細(xì)胞前平衡好。在細(xì)胞加人前將培養(yǎng)液加入培養(yǎng)瓶中，并將蓋子松松地蓋上，置培養(yǎng)箱中放罝 10~15 分鐘即可。

4) 在接受細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中混勻細(xì)胞，將細(xì)胞懸液均勻鋪在容器表面、細(xì)胞貼壁通常笫 8~10 小時，人二倍體成纖維細(xì)胞經(jīng)常按以 1:4 比例，一周傳代一次。細(xì)胞倍增時間的估算可采用以下方法：即滿版細(xì)胞 1:2 比例傳代后再次鋪滿培養(yǎng)瓶的時間，或以 1:4 比例傳代兩次細(xì)胞倍增時間后細(xì)胞再次鋪滿。