H1人胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題

疑難解答

•是否還需要往H1細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基中補(bǔ)充或添加成分？

不需要。H1細(xì)胞培養(yǎng)基中各個(gè)成分的質(zhì)量和濃度都經(jīng)過(guò)了優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，支持人ESC/iPSC的長(zhǎng)期培養(yǎng)，無(wú)需再自行添加。

•培養(yǎng)基中有沉淀狀物質(zhì)是否是質(zhì)量問(wèn)題？

添加劑在解凍過(guò)程中，若有少量沉淀析出，屬于正常現(xiàn)象，不影響使用，請(qǐng)充分混勻后與基礎(chǔ)培養(yǎng)基混合。但添加劑不能在37℃解凍，否則會(huì)析出大量沉淀，影響培養(yǎng)基的效價(jià)。如果培養(yǎng)基中出現(xiàn)大量沉淀，請(qǐng)不要使用。

•是否能在37 ℃反復(fù)水浴H1細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基？

不能。頻繁地在4℃和37℃之間轉(zhuǎn)換會(huì)導(dǎo)致H1細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基中含有的因子失活，H1細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基在使用前平衡至室溫即可。

• H1細(xì)胞在傳代后不貼壁怎么解決？

造成H1傳代后不貼壁的最可能的原因：

① 細(xì)胞消化時(shí)間不合適；②消化后吹打次數(shù)不合適，使得完成傳代后細(xì)胞集落過(guò)大或過(guò)小。

• H1分化怎么處理？

① 細(xì)胞在剛復(fù)蘇或傳代時(shí)，小的細(xì)胞團(tuán)不呈現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)的克隆形態(tài)，培養(yǎng)幾天或傳代后可恢復(fù)。②如果H1分化的表現(xiàn)為干細(xì)胞克隆形態(tài)良好，克隆周邊出現(xiàn)散在的分化細(xì)胞，可通過(guò)高比例傳代（≥1:10），使得分化細(xì)胞的密度減少，低密度的分化細(xì)胞可被H1培養(yǎng)體系篩選去除，如未全去除，可用細(xì)胞刮或巴斯德管刮除。

② 如果H1分化的表現(xiàn)為克隆內(nèi)部松散，邊緣不平滑，在分化比例小或分化不嚴(yán)重的情況下，可通過(guò)連續(xù)傳代2 ~ 3次恢復(fù)，如果分化嚴(yán)重，建議棄除。

• 細(xì)胞復(fù)蘇率低是什么原因？

細(xì)胞復(fù)蘇需使用H1細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)基，可大大提高細(xì)胞的復(fù)蘇效率。復(fù)蘇過(guò)程中，轉(zhuǎn)移細(xì)胞、吹打混勻和重懸細(xì)胞時(shí)，吹打力度要輕柔，并盡量減少吹打次數(shù)，細(xì)胞接種后，即刻在顯微鏡下觀察細(xì)胞團(tuán)塊的大小，4 ~ 10個(gè)細(xì)胞的團(tuán)塊為最佳。如果吹打力度過(guò)大或次數(shù)過(guò)多，導(dǎo)致細(xì)胞分散成單細(xì)胞，細(xì)胞復(fù)蘇率將偏低。

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