細(xì)胞融合的方法及誘導(dǎo)物

同種細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)2個(gè)靠在一起的細(xì)胞自發(fā)合并，稱(chēng)自發(fā)融合;異種間的細(xì)胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合，稱(chēng)誘發(fā)融合。

仙臺(tái)病毒法融合

①兩種細(xì)胞在一起培養(yǎng)，加入病毒，在4℃條件下病毒附著在細(xì)胞膜上。并使兩細(xì)胞相互凝聚;

②在37℃中，病毒與細(xì)胞膜 發(fā)生反應(yīng)，細(xì)胞膜受到破環(huán)，此時(shí)需要Ca2+和Mg2+，最適PH為8.0一8.2;

②細(xì)胞膜連接部穿通，周邊連接部修復(fù)，此時(shí)需Ca2+和ATP;

④融合成巨大細(xì)胞，仍需ATP 。

聚乙二醇(PEG)法

聚乙二醇(PEG)結(jié)構(gòu)為：HOH2C(CH20CH2)nCH2OH，分子 量大于200小于6000者均可用作細(xì)胞融合劑。PEG經(jīng)高壓滅菌后，與溫?zé)岬腅ngle氏液混合。通常用分子 量低于1000的PEG作融合劑最好，50%PEG溶液能產(chǎn)生最多雜交細(xì)胞。PEG溶液在pH6.0時(shí)細(xì)胞融合率最高。

電融合法

在直流電脈沖的誘導(dǎo)下，細(xì)胞膜表面的氧化還原電位發(fā)生改變，使異種細(xì)胞粘合并發(fā)生質(zhì)膜瞬間破裂，進(jìn)而質(zhì)膜開(kāi)始連接，直到閉和成完整的膜，形成融合體。

優(yōu)點(diǎn)：融合率高、重復(fù)性強(qiáng)、對(duì)細(xì)胞傷害小;

裝置精巧、方法簡(jiǎn)單、可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過(guò)程;

免去PEG誘導(dǎo)后的洗滌過(guò)程、誘導(dǎo)過(guò)程可控性強(qiáng)。

融合誘導(dǎo)物

細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類(lèi)很多.常用的主要有生物法用滅活的仙臺(tái)病毒(Sendai virus)，化學(xué)法如用聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和物理法如電脈沖。目前應(yīng)用比較廣泛的是聚乙二醇，因?yàn)樗椎?、?jiǎn)便，且融合效果穩(wěn)定。PEG的促融機(jī)制尚不全部清楚，它可能引起細(xì)胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團(tuán)發(fā)生結(jié)構(gòu)重排。動(dòng)植物 細(xì)胞融合方法不同，生物法利用滅活仙臺(tái)病毒是動(dòng)物細(xì)胞融合所*的。

自發(fā)條件下或人工誘導(dǎo)下, 兩個(gè)不同基因型的細(xì)胞或原生質(zhì)體融合形成一個(gè)雜的細(xì)胞。基本過(guò)程包括細(xì)胞融合導(dǎo)致異核體(heterokaryon)的形成, 異核體通過(guò)細(xì)胞有絲分裂導(dǎo)致核的融合, 形成單核的雜的細(xì)胞。有性生殖時(shí)發(fā)生正常的細(xì)胞融合, 即由兩個(gè)配子融合成一個(gè)合子。

細(xì)胞融合不僅可用于基礎(chǔ)研究，而且還有重要的應(yīng)用價(jià)值，在植物育種方面已經(jīng)成功的有蘿卜+甘藍(lán)、粉藍(lán)煙草+郎氏煙草、番茄+馬鈴薯等等。細(xì)胞融合另一個(gè)重要應(yīng)用就是制備單克隆抗體，單克隆抗體可以用作診斷試劑，治療疾病和運(yùn)載藥物，具有準(zhǔn)確，高效，簡(jiǎn)易，快速等優(yōu)點(diǎn)。

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