冷凍組織及切片的準備

一、材料

1. 緩沖液、溶液和試劑

丙酮

蒸餾水

干冰

磷酸鹽緩沖液（PBS)

Tek OCT 組織復合物（Sakura FinetekUSA，Torrance，CA)

2. 特殊設備

封閉容器

燒杯

恒冷裝置

解剖工具

平盤

可以削去的一次性組織模子（Pelco International，Redding，CA)

普通的無粘片劑的載玻片

Sakura 刀片（IMEB，SanMarcos，CA)

3. 細胞和組織

新鮮的組織（見二、方法中的（2））

二、方法

1. 冷凍組織的準備

(1) 蓋上盛有包埋介質的模子（推薦使用 Tek O C T 組織復合物），準備干冰-丙酮浴(在燒杯中簡單混合干冰和丙酮）。

(2) 處死動物并取出目的組織與包埋介質混合。

(3) 放組織于冷模子底上。為了便于利用恒冷裝置，反向放目的切面于冷模子底上。

(4) 將冷模子的底部放于干冰-丙酮浴的表面，這樣樣品將在 3~4 min 內逐漸冷卻。當品冷凍后將呈現(xiàn)白色。在冷凍時不要將模子掉入丙酮中。

(5) 從模子中移去組織，放于-80°C 直到切片。如果組織樣品放置時間較長，將其放盛有冷的蒸餾水的密封容器中以保持濕度。

2. 切片及保存

(1) 取冷凍的樣品置于含 O C T 復合物的低溫冷箱中，采用標準的冷凍組織切片法。

(2) 讓樣品與冷箱中溫度（-25~-20°C) 平衡 15~20 min。如果樣品在切片時組織塊太冷，平衡時間可以適度延長。

(3) 將準備用于 LCM 的切片（厚度 1~5um) 放于普通的無粘片劑的載破片上。如果組織粘于載玻片上太緊，可能不利于后續(xù)的 LCM 操作。

(4) 放置好后，立即放到干冰上。如果當天做 LCM，片子應當放在干冰上。否則，應儲存于-80°C。