Starvio siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)指南--細(xì)胞狀態(tài)

RNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的影響因素有很多，而細(xì)胞狀態(tài)往往是同學(xué)們最容易忽略的一點(diǎn)。如果細(xì)胞狀態(tài)差，那么轉(zhuǎn)染時就會出現(xiàn)細(xì)胞死亡、轉(zhuǎn)染效率低下等結(jié)果。那么關(guān)于細(xì)胞狀態(tài)，我們應(yīng)該注意些什么呢？

一、使用凍存復(fù)蘇后，已傳了兩三代的細(xì)胞
剛剛復(fù)蘇的細(xì)胞十分脆弱，稍有不慎就會死亡，因此一切接觸細(xì)胞的動作都要盡可能地輕柔。一般而言，細(xì)胞在凍存復(fù)蘇后的一兩代之內(nèi)或直到它們?nèi)繌?fù)蘇之前都很難轉(zhuǎn)染。建議在傳代2-3代后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，此時的細(xì)胞從解凍過程中恢復(fù)過來，并恢復(fù)正常的生長速度，狀態(tài)較為穩(wěn)定。

二、細(xì)胞生長旺盛，形態(tài)正常
1、通常情況下，細(xì)胞在快速增殖時轉(zhuǎn)染效率較高，但在停滯或死亡時轉(zhuǎn)染效率明顯下降，因而進(jìn)行小核酸轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時，細(xì)胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期，同時細(xì)胞比活性應(yīng)保持在90%以上，這樣才能獲得較好的轉(zhuǎn)染效率。
2、其次，細(xì)胞具有多種多樣的形態(tài)，我們在使用細(xì)胞時，一定要牢記它本來的形態(tài)，如球形、桿狀、星形、多角形、梭形、圓柱形等，這樣才能及時發(fā)現(xiàn)細(xì)胞是否已經(jīng)變異，或是培養(yǎng)環(huán)境條件（密度、PH、培養(yǎng)基、微生物污染等）是否影響細(xì)胞正常生長。

三、注意細(xì)胞污染問題
1、細(xì)胞污染一般是由于操作不規(guī)范或無菌措施不到位等引起的，如真菌、細(xì)菌、支原體、黑膠蟲、病毒、細(xì)胞交叉污染等，繼而導(dǎo)致不同程度的細(xì)胞退化、活性下降、生長變緩、甚至細(xì)胞死亡。
2、如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染，須立即停止實(shí)驗(yàn)并及時處理污染源，以免造成更大的影響。切勿急功近利，使用受污染的細(xì)胞，否則會造成實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的錯誤、影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

以上就是針對于siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)有關(guān)于細(xì)胞狀態(tài)需要注意的方面。要知道無論是什么科研，好的實(shí)驗(yàn)材料才能鑄就好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，希望大家可以重視起來，切莫因小失大！

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